可根據(jù)當(dāng)前的細(xì)胞狀態(tài)以及使用的誘導(dǎo)試劑來(lái)決定是否接觸抑制；

使用普諾賽的成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞時(shí)，不需要接觸抑制2天。在細(xì)胞接種后，密度達(dá)到95%-100%時(shí)，即可開(kāi)始誘導(dǎo)；

誘導(dǎo)期間細(xì)胞是在緩慢增殖和誘導(dǎo)分化的。在這個(gè)過(guò)程中，細(xì)胞會(huì)逐漸退出生長(zhǎng)期，同時(shí)也保證了細(xì)胞處于最佳狀態(tài)開(kāi)始分化。

在成脂誘導(dǎo)過(guò)程中，A液和B液交替換液；

換液時(shí)，可以用PBS洗滌細(xì)胞1次，但需要注意操作時(shí)清洗細(xì)胞的次數(shù)越多，越容易造成細(xì)胞卷邊漂浮；

若操作熟練且細(xì)胞狀態(tài)較好，可以盡可能的吸去A液，然后再沿著孔壁緩慢加入預(yù)熱好的新鮮B液，反之亦然；若操作不熟練，可嚴(yán)格按照以下操作：用PBS 清洗細(xì)胞1次，換液時(shí)可先吸出大部分培養(yǎng)基或PBS緩沖液丟棄，留少量原液在孔板內(nèi)作為緩沖，接著沿孔壁緩慢加入要更換的預(yù)熱新鮮培養(yǎng)基。

3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)細(xì)胞可進(jìn)行成脂誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)，普諾賽也有配套的成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基（貨號(hào)：PD-031），具體步驟可以參考配套誘導(dǎo)分化試劑的說(shuō)明書(shū)；

MC3T3-E1 Subclone 14 (小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14)細(xì)胞可用于成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)，普諾賽也有配套的成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基（貨號(hào)：PD-033），具體步驟可以參考配套誘導(dǎo)分化試劑的說(shuō)明書(shū)。

如果是在誘導(dǎo)過(guò)程中拍照觀察細(xì)胞狀態(tài)，請(qǐng)不要打開(kāi)蓋子，防止細(xì)胞污染，影響后續(xù)細(xì)胞的狀態(tài)；

誘導(dǎo)過(guò)程中可通過(guò)鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，比如細(xì)胞是否出現(xiàn)卷邊漂浮、碎裂、污染等情況來(lái)判斷誘導(dǎo)過(guò)程是否順利；

若誘導(dǎo)過(guò)程中，細(xì)胞出現(xiàn)輕微卷邊現(xiàn)象，在換液過(guò)程中要更加輕柔，可留少量原液作為緩沖，培養(yǎng)基37℃復(fù)溫后再使用；或者使用包被過(guò)的孔板進(jìn)行誘導(dǎo)，增強(qiáng)細(xì)胞的吸附性，減少卷邊漂浮的情況；

若發(fā)現(xiàn)污染情況，請(qǐng)立即排查試劑、耗材等污染源，小心處理已經(jīng)污染的板子，防止污染其他孔板；

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，建議多做幾個(gè)單獨(dú)孔板的重復(fù)組。在誘導(dǎo)后期，可通過(guò)鏡下觀察和染色來(lái)判斷誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)是否成功。

包被是為了增強(qiáng)器皿的吸附性，從而使細(xì)胞能夠更好地展開(kāi)，貼壁更牢，有效預(yù)防在誘導(dǎo)過(guò)程中細(xì)胞出現(xiàn)卷邊或漂浮的情況；

若細(xì)胞誘導(dǎo)時(shí)間長(zhǎng)了，出現(xiàn)聚集的情況，老師在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)可注意提前包被孔板、控制初始細(xì)胞接入量、細(xì)胞鋪板均勻、換液輕柔、培養(yǎng)基復(fù)溫等細(xì)節(jié)，盡量減少對(duì)細(xì)胞的刺激。

軟骨球切片厚度為3~5 μm，誘導(dǎo)結(jié)束后的軟骨球直徑大概在1~2 mm左右；

開(kāi)始誘導(dǎo)的細(xì)胞量需要嚴(yán)格控制在2.5~3*10⁵ cells/0.5 mL/管；

細(xì)胞量太多的話，球過(guò)大，誘導(dǎo)過(guò)程中可能會(huì)導(dǎo)致一些細(xì)胞死亡，球破裂；細(xì)胞量太少的話可能難以形成球，即便形成了較小的軟骨球，后續(xù)操作也不好進(jìn)行；

培養(yǎng)的球直徑比較小，可能原因是初始細(xì)胞量較少、誘導(dǎo)時(shí)間短、沒(méi)有誘導(dǎo)成功等。切片厚度可以控制在4 μm，切片正常的話，肉眼可觀察到有一個(gè)很小的軟骨球片，呈小圓餅狀，染色后肉眼可見(jiàn)更加明顯。